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酵母展示文库构建


    酵母表面展示技术广泛用于抗体文库筛选、抗体体外亲和力成熟等领域。我公司技术平台积累多年抗体发现技术经验,构建自有的酵母展示、筛选系统,为客户高效地从文库中发现高亲和力、高稳定性抗体。


技术原理


    我们将携带文库的蛋白支架与酵母细胞壁上的Aga2蛋白进行融合表达。Aga2融合蛋白通过两个二硫键与α-凝集素Aga1蛋白连接,从而在酵母细胞表面上产生共价复合物。 在该系统中,编码Aga1蛋白的基因稳定整合到酵母染色体中,而编码蛋白质支架-Aga2融合体的基因克隆到环状酵母展示质粒载体中,该载体使用营养标记物在酵母中维持选择性生长。 通过培养基中加入半乳糖诱导酵母进行表面展示,再结合磁珠及FACS分选技术进行多轮筛选,可得到高亲和力、高稳定性的克隆。


技术优势


1、与噬菌体展示相比,抗体库酵母表面展示具有显著的优势。 酵母具有类似于高等真核生物的分泌途径。 蛋白质折叠在内质网中,其中伴侣蛋白,折叠酶和质量控制机制确保仅分泌正确折叠的蛋白质。

2、通过噬菌体展示筛选更高亲和力的抗体时,通常会受到筛选处理过程的不利影响,不仅取决于亲和力,还取决于抗体表达水平。而酵母展示系统采用FACS分选技术,基于抗体亲和力及展示水平进行筛选,因此消除了表达引起的偏差,且能区分相差很小亲和力的克隆。

3、通过使用双染色的 FACS,可以直接在酵母细胞表面上确定抗体亲和力,从而无需耗时的亚克隆、表达和纯化。

4、抗体筛选速度快,且在相同的展示系统下可对抗体的亲和力和稳定性进行优化。


酵母展示文库交付标准


1.酵母展示文库插入率大于99.99%

2.随机挑取48个克隆进行测序,序列不重复

3.库容量大于1*108



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