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噬菌体展示多肽文库构建

噬菌体展示技术是将外源肽或蛋白质与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示在其表面,同时将遗传密码信息整合到噬菌体的基因组中的一种技术,广泛应用在蛋白组学,未知基因的克隆和测序等多个分子生物学领域。该技术的特点主要是能将特定分子的基因型与表型统一在同一噬菌体颗粒内,即在噬菌体的表面展示特定蛋白质,而在噬菌体的核心DNA中含有该蛋白的结构基因。

多肽文库目前应用非常广泛,在蛋白相互作用,蛋白功能研究,抗原表位筛选,酶活性中心研究,信号分子研究,GPCR,药物研发等多个领域都用到。阿帕克生物具有完善的噬菌体表面展示平台,为客户提供PIII 单价展示,多价展示,或PVIII多价展示多肽文库。根据客户要求可设计多种长度以及环肽噬菌体文库,能够高效快速的构建库容量为109~1010多肽文库。

构建方法

1.根据客户要求体外化学合成随机寡核苷酸序列

2.提取噬菌体或噬菌粒载体dU-ssDNA

3.采用T4连接酶与T7聚合酶合成CCC-dsDNA

4。采用电转化的方法,一次电转化构建库容量为109~1010文库

阿帕克的技术优势

1.采用新一代的建库方法,不使用限制性内切酶,避免出现多肽串联连接,提高连接效率;

2.改变传统电转感受态制备方法,改变了培养基的配方,高密度培养大肠杆菌,同时改变大肠杆菌细胞壁成分,使其更容易接受外源DNA 片段,使感受态效率大大提高至1010~1012.





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